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[主观题]

简述随机PCR实验步骤。

答案
解析:(1)先进行寡核苷酸的设计与合成:随机序列区,这是结合蛋白质的区域,长度从几个到几十个碱基不等。随机序列区两侧是确定序列区,长度一般为15-20个碱基。 (2)合成后的寡核苷酸经纯化后进行标记,制备成含有随机序列的寡核苷酸探针。 (3)进行多次的凝胶滞后实验,将随机序列中能够结合蛋白的特异性探针序列分离出来,即先经凝胶滞后实验纯化探针,经PCR扩增,再经凝胶滞后实验纯化,PCR扩增,如此多次直到只有特异性探针为止,最后将纯化的特异结合序列探针PCR扩增后,进行克隆和序列分析,序列测定后,列表统计随机序列区各碱基出现的数量,计算每一个位置上各碱基出现的频率,最终确定蛋白质结合位点。
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